[求救] C2C12細胞培養的一些問題
我的實驗使用的是C2C12小鼠肌纖維母細胞
實驗的流程為
先以10%FBS DMEM培養繼代myoblast
需要實驗的時候以2% horse serum分化為myotube
在96well plate裡面以2%HS養1*10^4個細胞
培養兩天後加入含有100uM SNP(一種可以產生nitric oxide的藥物)DMEM
每次實驗進行到這邊
加入100uM SNP
原本myotube會像網子一樣爬滿well的底部
但是一加入藥物後
大概兩三分鐘~~放在顯微鏡下觀察
就會發現邊緣與管壁貼附的細胞開始慢慢脫離
然後就很像蜘蛛網有幾條固定外圍的線斷掉一樣
整片細胞會向內摺起來
曾經考慮過是不是濃度過高的問題
但是之前測試濃度的時候
是先將細胞與藥物混和 再放入96well盤
這樣就可以生長得很好
偏偏因為SNP會一直產生NO 導致濃度降低
所以想仿照PAPER上面寫的12小時換一次藥
但是只要一換藥~細胞就會發生上述的情況
想請問版上各位前輩~~是否有過類似的經驗~~
或是有甚麼建議我可以嘗試的方法
先謝謝大家!!
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
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推
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