超節省繼代細胞法

看板Biotech作者janemary (珍)時間15年前 (2010/07/26 17:52)推噓8(8推 0噓 19→)

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剛開始學養細胞時進階舉辦了一場有關細胞培養的演講講師是食研所的負責人他說食研所負責這麼多種的細胞培養他們繼代時從不離心因為離心傷細胞那這樣子要怎麼passage呢? 我發展了一套超節省超環保的繼代細胞法過程中只需要用2支無菌dropper 完全不需用到塑膠pipette 但前提是須將細胞養在10cm dish中以我的MRC-5 cell為例 1. 一開始解凍細胞時須以37℃快速解凍後，就直接將細胞加入10cm dish中， medium約10mL，不需離心，隔天等細胞貼上後換medium就好換medium時直接把上蓋打開把medium倒到廢液桶就好，再用dropper吸約7mL medium到dish中。大部分的細胞 (像我的MRC-5) 是不太會受低濃度的DMSO影響的，只有少部分細胞很敏感才需要以離心把DMSO去掉，例如 MDCK cell。而直接把上蓋打開把medium 倒到這種豪氣的作法是要勇氣的，要一氣呵成 (其實就跟配meduim一樣，大家不都是把DMEM跟MEM直接倒出來到flask中) 本人從沒有污染過，同事看我這樣也很傻眼沒人跟進，但是這樣就直接省下了1支塑膠pipette，吸medium時我都是用 dropper，只是要吸很多次而已，除非是在分細胞到很多well中才會用到比較方便的pipette。成本來說無菌dropper約3元/支，5mL pipette約4.2元/支， 10mL pipette約4.5元/支。 2. 繼代細胞時，一開始也是直接把medium倒掉後，用dropper1吸約2.5~3mL PBS 輕輕滴到細胞上 (此時把dropper1要留著倒放在架子上，不要碰到別的東西就好，通常我們都用50mL離心管所附的保麗龍)，以PBS wash細胞後直接倒掉，再用 dropper1吸1mL T/E到dish (因為T/E本來就是溶在PBS中，所以不衝突) ， dropper1一樣要留著，接下來就是放到37℃作用。這一步是關鍵步驟，每個細胞作用時間不一樣，開始時要test作用時間，要找到細胞要掉不掉的時間，像我 MRC-5作用4min會全掉下來，但作用2.5min時不拍它，它還是暫時不會飄起來，為什麼要這樣子？因為作用到2.5min時就用dropper1把T/E吸掉 (dropper1要繼續留著)，此時細胞還在disk上。用dropper2吸約2mL medium到dish中 (dropper2要留著)，再用dropper1 pipetting細胞看要分幾分幾，再用dropper2 補足medium。整個過程只需用到2支dropper，省下了離心管和無數支pipette，我相信大部分的人每一個步驟都用掉一支pipette，整個過程下來4~5支pipette外加一支離心管跑不掉，因為很過程麻煩，大家又怕污染，所以不好推動，給大家參考囉！ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.125.206

推

tsubasawolfy

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tsubasawolfy

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ordinary07

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