[討論] urea denature protein會什麼會變褐色？

看板Biotech作者 (小蛙)時間14年前 (2010/06/30 20:50), 編輯推噓3(3推 0噓 4→)
留言7則, 5人參與, 最新討論串1/1
小妹目前實驗是利用E.coli大量表現融合蛋白 所得到的target protein為inclusion body 所以打完sonication是取pellet的部份以denature buffer（8M urea,50mM Tris-HCL, 0.5M NaCl)回溶，結果發現溶液呈現褐色，當然離完心的上清液跟pellet也都是深褐色 (離心條件為13,000rpm 4度C 15min)，想問為什麼會這樣?是因為蛋白質濃度太高嗎? 還是沒有破菌完全?這樣會影響到通column或蛋白質活性嗎? 真的非常困惑....麻煩大家可以幫忙解解惑 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 220.137.56.87
推
06/30 22:24, , 1F
我是洗了三次pellet後上清液才會變清澈
06/30 22:24, 1F
推
06/30 22:58, , 2F
我的是淡淡的褐色,8M Urea會不會太高?(6M)
06/30 22:58, 2F
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06/30 22:58, , 3F
sonication 要注意不能回溫或過熱喔!
06/30 22:58, 3F
推
06/30 23:22, , 4F
會不會是pH值的問題,變色通常是protein變性了
06/30 23:22, 4F
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07/01 13:59, , 5F
不懂會什麼要洗三次...protein不是在上清液嗎?><
07/01 13:59, 5F
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07/01 14:00, , 6F
我的protein 6M沒辦法溶耶
07/01 14:00, 6F
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07/01 15:11, , 7F
protein在上清液的話pellet就可以丟了zz
07/01 15:11, 7F
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