[討論] 做time cross加藥

看板Biotech作者 (I'm your Debby)時間15年前 (2010/06/29 15:52), 編輯推噓5(5推 0噓 12→)
留言17則, 6人參與, 最新討論串1/1
最近在做一連串的加藥動作 dose做完了 於是想做time ceoss 看一下protein的磷酸化 以及量的變化 因為在之前實驗室 是用"倒著加藥"的方式 也就是starvation overnight之後 晚上七點加24小時 隔天早上七點加12小時 中午11點加8小時 一直到晚上七點就統一收cell lysate 但是現在的實驗室是用"正著加藥"的方式 也就是統一早上七點加藥 之後每隔幾個小時收時間點 一直收到隔天早上七點 不知道這兩種加藥方式到底有甚麼不同 因為看起來倒著加藥很方便 不過正著加藥似乎又比較符合做實驗的條件 大家都是怎麼做這樣子的實驗啊??? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.120.208.44
推
06/29 16:44, , 1F
看你實驗目的呀 從細胞數目多寡下去考量
06/29 16:44, 1F
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06/29 16:47, , 2F
btw 是time course吧@@?
06/29 16:47, 2F
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06/29 17:31, , 3F
我不太知道正確的拼字 我只是想知道這兩種加法
06/29 17:31, 3F
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06/29 17:32, , 4F
有甚麼不同之處而已
06/29 17:32, 4F
推
06/29 17:48, , 5F
如果時間點拉的很長ex.24h 48h 72h 倒著加藥要考慮細胞
06/29 17:48, 5F
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06/29 17:49, , 6F
一開始seeding的數量 因為48或72h細胞會生長 我聽過有人
06/29 17:49, 6F
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06/29 17:50, , 7F
是倒著加藥所以後面的時間點會細胞少下一些 不過我自己
06/29 17:50, 7F
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06/29 17:51, , 8F
都用正著加 時間點一多會比較辛苦罷了@@ 我是覺得時間點
06/29 17:51, 8F
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06/29 17:52, , 9F
不長的話 細胞變化應該不大..
06/29 17:52, 9F
目前我做的加藥都只到24小時 不過也有想過細胞數目這一點@@ 另外 正著加藥不是每個時間點都要帶一CONTROL嗎?? 這樣在跑WB的時候不就很難loading @@ ※ 編輯: fightwith 來自: 140.120.208.44 (06/29 18:11)
推
06/29 22:07, , 10F
這樣加藥是偷吃步啊~若把這方法寫在PAPER上會接受才神奇
06/29 22:07, 10F
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06/29 22:08, , 11F
細胞密度差異~很多分子表現量都不同了
06/29 22:08, 11F
我倒是知道有實驗室用倒著加藥 也有順利發PAPER
推
06/30 07:44, , 12F
有人做WB會不定量的嗎?
06/30 07:44, 12F
我的意思不是說不定量 是指說每個時間點帶control 跑WB的well不會不夠用嗎?
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06/30 08:09, , 13F
一起收是最嚴謹的方法
06/30 08:09, 13F
所以正著跟倒著都要作看看囉??這的確是最嚴謹的做法 ※ 編輯: fightwith 來自: 140.120.208.44 (06/30 10:37)
推
06/30 11:05, , 14F
每個時間點要不要帶control看你實驗目的而定
06/30 11:05, 14F
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06/30 11:05, , 15F
well不夠就多做幾片膠又不會死人
06/30 11:05, 15F
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06/30 17:47, , 16F
不能倒著加啦, 你的時間點看起來沒有很變態阿
06/30 17:47, 16F
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06/30 17:48, , 17F
我收0,8,12,16,20,24,32都一起加 痛苦幾天就好了
06/30 17:48, 17F
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