[討論] in vitro kinase assay

看板Biotech作者 (飛得越高是給越多人看)時間15年前 (2010/06/23 17:42), 編輯推噓3(3推 0噓 5→)
留言8則, 6人參與, 最新討論串1/1
我把A蛋白的DNA序列接上pcDNA3.1(-), 再transfect進入細胞去大量表達 A蛋白.現做過A蛋白的IP, 可與B kinase結合. 現在想要利用in vitro kinase assay的方法去看A蛋白是否能影響B kinase的活性. 各位知道有什麼方式可以不用放射性的方法來測試嗎 細胞內生性的B kinase會因為太少, 而偵測不到嗎 如果再加上抗體與A蛋白的專一性不夠好的話, 實驗應該很難成功吧 有人做過類似的實驗嗎 煩請賜教 謝謝 -- -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 211.76.175.171
推
06/23 17:57, , 1F
看kinase下游阿...看他的substrate..比如說看GSK3beta常常
06/23 17:57, 1F
→
06/23 17:57, , 2F
就是看beta-catenin的量
06/23 17:57, 2F
推
06/23 18:05, , 3F
in vitro跟你倒數三四行無關吧
06/23 18:05, 3F
→
06/23 19:38, , 4F
那MEKK3呢 p38嗎
06/23 19:38, 4F
推
06/23 23:11, , 5F
試試看phospho-p38
06/23 23:11, 5F
→
06/24 02:59, , 6F
若沒有phospho-specific antibody 就只能用gamma-32P ATP了
06/24 02:59, 6F
→
06/29 20:03, , 7F
可以用該kinase的substrate來做，再用p-substrate 的抗體
06/29 20:03, 7F
→
06/29 20:05, , 8F
不需要用到放射線同位素
06/29 20:05, 8F
‣ 更多 liquidwater 的文章
文章代碼(AID): #1C8TSHgQ (Biotech)