[求救] 請教關於製造病毒感染的問題
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章----
我在進行病毒製造與感染
用的是中研院RNAi core 的系統
http://rnai.genmed.sinica.edu.tw/Vector_Information_C6-6.asp
pMD.G
delta8.9
外加一個表現綠螢光的pGIPZ (lentiviral shRNAmir empty vector )
目前遇到的問題是感染率普通 (感染後三天流式細胞儀分析約 40%)
(有加polybrene, 加病毒液後有再離心1000g, 30mins)
但是螢光顯微鏡下可判讀的螢光約只有10%
於是想提高感染率
我的老闆提供的改良是:
1. 病毒液用2~3% FBS 之medium 去製造
避免病毒製造細胞活力太旺培養液太黃
影響titer
2. 病毒液感染後(加polybrene, 離心後)
由於病毒已經沾粘細胞
即可拋棄病毒液, 更換培養液 (一般protocol 似乎是泡在病毒液中一天)
然後我自己想的辦法就是增加感染次數
目前預計每12hr 感染一次, 比較感染1, 3, 6 次的感染率及螢光強度
關於我老闆說的改良方式
我沒試過聽起來毛毛的
想請問有經驗的人
對於我目前進行的這三種促進方案有沒建議意見
或是是否有其他有效的方案
感謝~
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 210.60.122.14
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