[討論] 冷凍解凍會對DNA濃度改變?

看板Biotech作者 (BEE)時間15年前 (2010/04/28 21:59), 編輯推噓2(2014)
留言16則, 5人參與, 最新討論串1/1
小弟目前利用luciferase來檢測promoter的活性 同一個promoter做serial deletion所以有4~5種plasmid constructs 因為這實驗plasmid濃度很重要(統一我都下1ug) 在第一次時 用nanodrop測過濃度後開始我的實驗 (平常儲存DNA聽建議都放-20) 所以在進行第二次實驗將DNA解凍後 想沒事說來測個濃度看看(不到一個禮拜) 硬生生有幾管濃度就是偏高跟偏低(差了快100多ng) 讓我有點傻眼 想說會不會是因為冷凍解凍的關係 還是我第一次沒重複測很多次 所以我重新在測很多次 確定濃度改變不大 完成我的實驗 (共做了兩次 DNA改存放在4度C 等到確定不用時 我才凍回-20) 隔了兩個禮拜多 重新解凍 心裡不安的又去測了一下濃度... 這次又有兩管DNA濃度不一樣了 Orz 但是其他管還蠻接近的 差了也是一兩百ng (機器才剛校正過) 誰能告訴我是怎麼回事嗎.....Q_Q 還是說我只要使用前都測一下濃度 然後在來調整我下的量就好勒 (自己想說是不是每次應該都要一樣勒) -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.84.225

04/29 00:07, , 1F
我覺得1.準備時濃度預先提高 2.疑問是大大有先spin才測?
04/29 00:07, 1F

04/29 00:51, , 2F
h大 我的濃度都500ng/ul以上 所以下的量都是不到3ul
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04/29 00:52, , 3F
我測之前有spin 不過倒是都放在冰上~不知道會不會影響
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04/29 01:25, , 4F
是抽大量時 沒溶完全嗎?
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04/29 10:10, , 5F
我們家倒是有遇過大量抽失敗的經驗
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04/29 10:11, , 6F
應該不會影響太大 回蜜蜂大 DNA的量夠做即可!!
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04/29 13:34, , 7F
可能是blank的關係 你連blank一起冷凍解凍看看
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04/29 20:50, , 8F
抽大量是用kit抽 溶得很好阿!所以h大覺得差1~2百沒關係囉?
04/29 20:50, 8F

04/29 20:51, , 9F
F大 我的blank是水(DNA用水elu) 不知道大家是不是用TE
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04/29 20:51, , 10F
因為抽完太低可以濃縮一下 所以我大多都用水
04/29 20:51, 10F

04/30 12:17, , 11F
我的意思是 每次重取水做blank都會有些微差異
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04/30 20:19, , 12F
這我倒沒想過 可是差到100~200ng...(而且還有其他管是準)
04/30 20:19, 12F

05/01 15:15, , 13F
如果你測DNA之前有稀釋的話 乘回稀釋倍數就會有明顯差異
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05/01 15:16, , 14F
這只是我的經驗啦 發現每次重取水做blank會有差
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05/22 23:12, , 15F
REPORT ASSAY有加renilla或beta-gal做internal control
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05/22 23:12, , 16F
所以其實還好不是嗎@@
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文章代碼(AID): #1Bs3zQ-R (Biotech)