[求救] 關於使用tn9 transposon 產生突變菌株的驗證

看板Biotech作者 (wilson)時間14年前 (2010/04/21 20:24), 編輯推噓2(207)
留言9則, 4人參與, 最新討論串1/1
小弟是念生物資訊的碩二的學生, 最近因為要提學位考, 老闆突然要我用實驗驗證我的分析結果, 於是......以下省略 我在paper中看到作者使用Tn9 對E.coli的特定基因 dam 進行lost function的突變 由於研究的關係,我們拿到這隻E. coli K12 tn9::dam mutant的細菌 只是要用PCR的方式去check他的dam有確實有被mutant, 我知道dam 基因的序列,但是我不知道他tn9插入的位置, 也不知道tn9的使用序列,或是長短 所以我不知道該如何設計primer去把他夾出來 這樣就無法跟wild type比較dam基因的序列差異 小弟生邊的人大都只會寫程式,沒有人可以詢問 請各位大大幫幫忙,非常感謝 m ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 120.126.36.171

04/21 20:30, , 1F
那就拿dam的DNA序列去做southern阿.....
04/21 20:30, 1F

04/21 20:35, , 2F
因為我們所上的實驗是只能做電泳,所以我也只能做做PCR去
04/21 20:35, 2F

04/21 20:36, , 3F
夾夾看,藉由大小來比較差異,可是我不知道該怎麼執行,
04/21 20:36, 3F

04/21 20:37, , 4F
很抱歉,問這麼不專業的問題,可是我只是個寫程式的研究
04/21 20:37, 4F

04/21 20:38, , 5F
生,老闆突然要我驗證,整個就是想要我死,我只有抽過DNA
04/21 20:38, 5F

04/21 21:44, , 6F
我想去P這個基因的全長 然後去定序 在上網和WT比對 就知
04/21 21:44, 6F

04/21 21:44, , 7F
到插在哪裡 和序列了
04/21 21:44, 7F

04/22 02:16, , 8F
如果只是要check就把dam分段批 電泳比對WT就可以了吧
04/22 02:16, 8F

04/22 11:12, , 9F
謝謝各位,我多設計幾段primer,去check看看
04/22 11:12, 9F
文章代碼(AID): #1Bpkvm0Q (Biotech)