[方法] 用enterokinase(EK)切protein的條件

看板Biotech作者 (Best)時間15年前 (2010/04/20 17:33), 編輯推噓0(0推 0噓 6→)
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各位板上高手 最近實驗遇到瓶頸,使用載體是pET系列, 想要把target protein前面 的一段thioredoxin用enterokinase(EK)切掉,但一直試不出EK的條件, 我的方法是把target protein用HIS tag方法純化出來後(有跑PAGE確定明顯有band) 加EK切 16'C 16hour後,跑PAGE完全沒band,室溫切16hour也是一樣沒band 真的找不到其他條件去切了,我找出幾個問題想問 1.實驗室的(SIGMA) enterokinase是固體,我用H2O去溶,這樣EK有活性嗎? 2.還是我直接破菌後不進行純化,破完菌切EK效果會比較好? 3.EK切完後還要再過一次colum純化,有什麼方法可以去掉potein中的EK? 感謝!!! -- -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.127.215.32
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sigma提供的datasheet是說要溶在enterokinase buffer裡，
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如果是買enterokinase solution，datasheet提到是溶在
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Tris-HCl, NaCl, CaCl2和glycerol。
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感謝~~k大建議容在哪種會比較好?
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我沒用過這東西阿；上面提到的chemicals是全部加在一起，
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你何不去sigma看看datasheet，濃度都寫得清清楚楚= =
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