[求救] lentivirus infection問題

看板Biotech作者 (落日殘紅始覺春空)時間16年前 (2010/04/08 21:57), 編輯推噓8(8017)
留言25則, 8人參與, 最新討論串1/1
最近在弄lentivirus knockdown實驗,有兩個問題想請問板上前輩: 1. 如果要做double knockdown,是否只要同時產生兩個病毒,再同時感染一盤細胞即可? 目前手上是只有lentivirus的系統,所以可能會考慮用同種的virus包裹不同的shRNA ,這樣行的通嗎? 還是必須要不同的virus system? 2. 我的系統來自於中研院的RNAi core,之前也想過把PGK-GFP的GFP切掉,換成我的基因 ,但一直無法成功得到重組質體。利用限制酵素去切GFP,會多出一個比GFP還大一兩 百bp的亮帶,但是用RNAi core網站上給的PGK-GFP序列卻只會切出GFP。這樣是否表示 我的PGK-GFP有問題? 還是說真正的序列本來就跟網站上給的不一樣? 但是它真的會 表現GFP。 因為有搜尋到板上有前輩也曾經用過這個方法,不知道是不是也是用 pGKGFP這個載體呢? -- 你是誰 我是山羌 沃!!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.72.49

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不行~一個細胞被一顆lenti感染後~就沒法再被第二顆感染了
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樓上是說 永遠嗎? 還是感染當下?
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因為我有做感染後select後再感染 OK
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同時丟兩種有帶GFP和DsRed的 也OK 同細胞有紅也有綠
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是說對於同一種virus而言嗎? 有看過paper用不同的virus做
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所以就不用算MOI嗎~最多就等於1~
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IPS不就是同時感染多達24種,才發現myc,oct3/4,sox2,klf4?
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如果行的話,那plaque assay不就算心酸的?!雖然不同病毒
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plaque assay會做序列稀釋就是怕高濃度的時候不只一顆
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我不確定我有無誤解,但這篇文章應該就是單一細胞
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同時感染多種單一病毒
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但若同種病毒去感染要怎麼做篩選??抗生素都是一樣的呀
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一個細胞應該是可以被好幾顆感染吧?!不然幹麻還要測titer
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定MOI呢? 我的觀念是這樣,有誤也請大家多指教
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我的觀念是可以 但MOI大到一個程度就只有病毒毒性的差別
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不好意思~後來去查證了~這得考慮到病毒特性等種種因素
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例如~有些病毒被A病毒感染後~就確定不能被B病毒感染
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A病毒跟B病毒非同種病毒
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另一種是同種病毒~但被一個病毒感染過後~第二個要感染成
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功的機率會下降~因為細胞會啟動抗病毒機制~是種干擾機制
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所以~只能說"感染效率會相對下降"~而非絕對不行~
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而lentivirus在求證過後~確定是可以同時感染的~
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不好意思~自己學藝不經,獻醜了~也感謝樓上幾位指教~
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文章代碼(AID): #1BlU2t9b (Biotech)