[求救] 請問蛋白質 (110kDa) 轉印上的效率問題

看板Biotech作者 (希望夢想成真)時間16年前 (2010/04/08 20:05), 編輯推噓3(3推 0噓 18→)
留言21則, 7人參與, 最新討論串1/1
這是一個有關於蛋白質轉印上的問題 目前遇到一個問題是 大小蛋白質轉置效率不同, 這是正常現象嗎 (常常分子量小的蛋白質有transfer過頭 而大蛋白質還留在SDS膠上) ==> 還是說換 "濕式轉置槽" 會比較好 (效率會提升嗎) ? (針對大蛋白質110 kDa) ==> 還是說 半乾式大家所使用的條件? 不知道可不可請板友提供一下 ------------------------------------------------------------------------- 所使用的membrave : PVDF (有甲醇活化過) 儀器 : 半乾式轉置槽 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.113.173.32
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04/08 20:39, , 1F
110kDa.. 根據BD Transduction Laboratories 表示:
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04/08 20:40, , 2F
>120kDa的protein transfer buffer中要加入0.05% SDS
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04/08 20:41, , 3F
500mA 轉 3hr..
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04/08 20:43, , 4F
transfer buffer:25mM Tris, 190mM glycine, 20%MeOH
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04/08 20:44, , 5F
這現象是正常的,大分子跑比較慢
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04/08 20:45, , 6F
transfer是濕式的...
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04/08 20:46, , 7F
不過我也想問同樣的問題... 有勞樓下~
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04/08 21:07, , 8F
我們家100kDa,semi-dry,20V30min...
04/08 21:07, 8F
推
04/08 21:59, , 9F
這是正常現象 就像五樓說的那樣 所以就看你想看哪個大小的
04/08 21:59, 9F
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04/08 22:01, , 10F
半乾式的話用 memb area * 1.5=安培數 跑1hr 大概30-90kDa
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04/08 22:02, , 11F
都會過去 但更小分子的可能會透過memb 更大分子可能還會再
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04/08 22:04, , 12F
膠上 不過我沒試過濕式 據說電流越小跑越久這個現象會減小
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04/08 22:18, , 13F
提高轉印buffer甲醇的濃度試試看
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04/08 22:27, , 14F
甲醇多反而更過不去吧?!
04/08 22:27, 14F
推
04/08 22:56, , 15F
多才會透--
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04/08 22:58, , 16F
謝謝各位的建議
04/08 22:58, 16F
推
04/08 23:33, , 17F
正常~大蛋白用溼式的效率比較好,不然就SDS多加一點點
04/08 23:33, 17F
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04/08 23:43, , 19F
這裡說甲醇多, 大分子反而難transfer,(NC膜和PVDF膜不同?)
04/08 23:43, 19F
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04/08 23:43, , 20F
不對...和膜沒關係=.=
04/08 23:43, 20F
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04/09 01:06, , 21F
甲醇幫助fix(有人transfer完會泡甲醇fix), SDS幫助游離~
04/09 01:06, 21F
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