[求救] 0.5% triton insoluble protein是不是很少?!

看板Biotech作者 (笨小孩~)時間14年前 (2010/03/24 00:38), 編輯推噓1(105)
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最近用polarized MDCK cell去作triton X-100 solubulity assay 看一些cytoskeleton-associated protein 用0.5% triton處理過後的細胞,絕大部分的protein都已經溶出(triton soluble) 剩下的pellet部份就是triton insoluble fraction 超難溶,用1% SDS去溶而且去測濃度(有時會sonicate/加熱很久) 濃度都很低 而且跑出來的band很像毛毛蟲,或常因protein量太少而壓不到band 很困擾.... 不知有無辦法可改善insoluble fraction 的 western quality?! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.112.206.77

03/24 12:22, , 1F
insouble protein本來就比較少 你說的低是多低?
03/24 12:22, 1F

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細胞可以養大盤一點試看看
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03/24 12:28, , 3F
我回溶pellet都是用RIPA mix均勻放冰上30min再sonicate
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03/24 12:31, , 4F
濃度是夠做WB的 如果還是不行可能你想看得蛋白本來就少
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03/24 12:32, , 5F
就用大well多load一點sample吧!
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10cm dish收下的insoluble protein約30-40ug
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文章代碼(AID): #1BgEw5D1 (Biotech)