[求救] 為什麼ip myc-tag Ab不會抓到內生性myc

看板Biotech作者 (GeneTech)時間14年前 (2010/03/22 18:06), 編輯推噓3(306)
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如題,想請問大家,myc-tag常常接在重組蛋白兩端 當我們將這重組蛋白的plasmid送入人類cell line 在用myc-tag Ab去做ip想看重組蛋白的表現量,以及 其他跟此重組蛋白有關的蛋白質, 那問題是,cell line往往myc就會大量表現 為什麼ip抓到的不是內生性myc而是重組蛋白 不懂 謝謝幫忙 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 120.126.49.38

03/22 19:58, , 1F
如果確定有這段序列,那就是被擋住了,常有的事
03/22 19:58, 1F

03/22 19:59, , 2F
只是tag常常都接尾巴或頭,接中間?第一次看到...
03/22 19:59, 2F

03/22 20:00, , 3F
看表現亮直接做WB即可何必用到IP?
03/22 20:00, 3F

03/22 22:25, , 4F
沒有看到說接中間啊?推測po應該也看跟該蛋白互動的成員?
03/22 22:25, 4F

03/22 22:40, , 5F
Orz..看錯
03/22 22:40, 5F

03/23 00:23, , 6F
boblu說的對,我就是要看蛋白質間的互動
03/23 00:23, 6F

03/23 11:58, , 7F
因為你用來pull down的抗體是anti-tag?
03/23 11:58, 7F

03/23 13:23, , 8F
因為量差很大 你送進去的會比endogenous多很多
03/23 13:23, 8F

03/24 09:21, , 9F
是anti-myc,當ip的ab
03/24 09:21, 9F
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