[求救] ALT活性分析的問題
我們說明一下我們學校的作的ALT酵素活性的過程
α-ketoglutarate + L-Alanine ←→ Pyruvate = L-glutamate
GPT
再把 pyruvate 拿去和 DNP反應 好了以後再加 NAOH
最後放到elisa reader 用 505nm的光去打 測吸收度
而另外而做標準曲線，讓樣本可以對照標準，來知道濃度
不過現在我有兩個問題...第二個其實是學校的作業，不過我想了兩個解法
也沒辦法證實哪個對錯，所以想請教一下各位
Q1. 為什麼 pyruvate 和 DNP 反應後產生 2,4-dinitrophenylhydrazone 後
還要加入 NAOH 再放到elisa reader 呢?
Q2. 在標線曲線制作的第一組是用 α-ketoglutarate + L-Alanine + DNP 再加入NAOH
而為什麼放在elisa 下 一樣會有吸光值呢?
在實驗室作過了實驗 DNP α-ketoglutarate 對505nm 的吸光值都很小
所以一定是發生了什麼反應
我的想法 1. 不用透過GPT，上述所說的反應會自已進行，所以就會產生pyruvate來反
應。
2. α-ketoglutarate 會自已和DNP產生反應，產生也會吸引 505nm的物質
在這裡我就卡住了...因為也找不到相關的資料，手邊也沒elisa reader
想請各位給我一點提示，不一定要告訴我答案 有資料可以參考就好了 謝謝各位
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