[討論] qPCR一問
qPCR的實驗流程
是先抽取出RNA
進行reverse transcription產出cDNA後再跑qPCR
想請問各位在跑qPCR之前的定量
會是以RNA的濃度為基準?
還是進行RT後的cDNA為基準?
其中量測濃度都是以NanoDrop進行
我有先爬文 但是好像都沒有看到相關的問題討論
目前我們實驗室出現兩派說法
一派是認為測RNA的量後就可以進行qPCR
因為測cDNA的量會受到管內過量的dNTP, primer, RNA, enzyme....因素影響吸光值
所以 cDNA的濃度是不準確的!!
一派是認為應該測定cDNA的量才進行qPCR
因為在RT的過程中 會有RT效率的不同
所以 應該以cDNA的濃度為準才對
我覺得兩方的講法都可以說的通
所以想問一下大家的想法是怎樣
謝謝!!
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