[求救] Western blot靠近兩邊的lane訊號較弱

看板Biotech作者Wacha (Wacha)時間16年前 (2010/03/10 07:19)推噓1(1推 0噓 6→)

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我做 Western blot時不論什麼sample都經常發生靠近兩旁的band訊號較弱，中間的band訊號較強，請問有先進能指點我如何改進嗎？謝謝！ 1st antibody 1:1000配成 1ml，用封口機封好塑膠袋後 4C放overnight (最近開始塑膠袋上下有用tip盒夾住，再加一點重量壓平) 2nd antibody 1:10000 配成 10ml, shaker搖1hr ECL做 1 min,有用1000ul的tip"桿"membrane,使ECL均勻分散，不致於集中在一沱。 milk濃度 5% -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 128.32.214.112

推

boblu

03/10 08:07, , 1^F

03/10 08:07, 1^F

謝謝您的回答。我本來用semi-dry transfer，後來改用wet transfer transfer完有用 Ponceau S染過,通常各個lane不會差很多我放完2nd antibody用shaker搖時，牛奶流動的方向和lane平行，不知道是不是因此造成不均勻，因為有時後mambrane會有些微彎曲，靠近兩邊的lane浸入牛奶的深度可能較淺。當然不能排除一開始protein的濃度就沒測準，不過每次都是中間的band比較黑實在很困擾。 ※ 編輯: Wacha 來自: 128.32.214.112 (03/10 09:31)

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sjacky

03/10 22:54, , 2^F

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sjacky

03/10 22:54, , 3^F

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sjacky

03/10 22:55, , 4^F

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