[問題] shRNA之transient transfection及stable transfection

看板Biotech作者 ( )時間16年前 (2010/03/02 20:23), 編輯推噓4(4推 0噓 8→)
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目前使用的shRNA是購於中研院 有表示其knockdown效率高達96% 但我用shRNA做transient transfection 使用lipo2000 RNAi transient tranfection 到HNK293 cell 隔天換新鮮medium培養，三天後取細胞total RNA 最後做RT-PCR 結果knockdown效率超差 所以想請問板上是否有人做過類似實驗? 在transient transfection之前，shRNA是否有何處理? 或使用哪種liposome? transfection時細胞幾成滿? 等等詳細流程，先在此感謝各位回覆 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.25.118.180
推
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HEK??
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shRNA from BROAD(中研院RNAi core) 有時就是這樣
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你看到的宣稱有KD高效率 應該是別人回傳的data吧
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btw 中研院那邊應該每個gene都有對應至少五個shRNA
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有全部買來試過嗎? 五個應該也才不到一千塊(NTD)
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03/03 07:59, , 6F
對 是HEK293 打錯 謝謝
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推
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中研院的pLKO.1直接transient transfect效率很差
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基本上pLKO.1是給你package lentivirus用的 不是給你直接送
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03/03 10:30, , 9F
你要直接挑stable才有效果 但我建議做virus比較快
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推
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transient 不會差阿 尤其是用293 or 293T
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推
03/03 12:15, , 11F
是knockdown效率 很多人試過效果很差 原因不清楚
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03/03 12:16, , 12F
也許是因為它搭載的是U6 promoter?
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