[求救] MTT ASSAY 吸光值不穩定
大家好
最近我在養HT-29(大腸癌細胞)
HT-29 目前在做 我的樣品對於這株細胞之存活率影響
我的樣品是乳酸菌加寡醣之發酵液(過濾後無菌液)
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由於實驗室很少人做細胞 所以不太有經驗
目前我在做MTT ASSAY
但是它吸光值都會乎大乎小
以下是我的步驟:
1. 每WELL種10^5細胞，貼附24小時
2. 24小時候加樣品，反應24小時
3. 吸出樣品，以PBS洗過一次
4. 加入MTT(溶於SF-MEDIUM)，反應4小時
5. 吸出MTT，以PBS洗一次，再加入DMSO，放置15分鐘測吸光值
我聽別人說 CONTROL(PBS)大約吸光值在0.8為正常
可是我的吸光值光是每個WELL的變異就超大
請問我大概會是哪步驟有問題或是出錯? 以至於變異大
又請問 每個樣品三重複 一個重複要LOAD幾個WELL比較好?
先謝謝大家了..
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.112.98.78
推
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