[討論] 請問大家PCR XX加太多為何做不出來

看板Biotech作者 (露露莎)時間14年前 (2010/02/01 23:11), 編輯推噓9(9推 0噓 6→)
留言15則, 9人參與, 最新討論串1/1
常碰PCR的人 應該有聽過學長姐老師說過 DNA 加太多 會做不出來 dNTP加太多 會做不出來 Taq 加太多 會做不出來 primer加太多也會做不出來 能否請問大家 為何當我單項的東西加太多的時候就會做不出來呢? 我的意思是 我知道Taq加太多的時候 有一個原因是因為甘油太多干擾反應 那其他的solution呢? 謝謝回答 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 114.137.30.229
推
02/02 10:01, , 1F
請考慮Non-specific binding
02/02 10:01, 1F
推
02/02 10:14, , 2F
因為太浪費 上天懲罰你
02/02 10:14, 2F
→
02/02 10:15, , 3F
把反應式推到極端 自然就不再有反應了
02/02 10:15, 3F
推
02/02 10:26, , 4F
primer太多容易產生dimer DNA dNTP太多會有非專一反應
02/02 10:26, 4F
→
02/02 10:28, , 5F
純屬推測 畢竟我沒嘗試也不想嘗試...
02/02 10:28, 5F
推
02/02 10:59, , 6F
你可以下次就try一下 meeting問問你老闆XDDD
02/02 10:59, 6F
→
02/02 11:00, , 7F
just kidding 我覺得會有1F和4F的情形
02/02 11:00, 7F
推
02/02 11:59, , 8F
一個和尚挑水喝,兩個和尚抬水喝,三個和尚沒水喝! 了解了嗎
02/02 11:59, 8F
推
02/02 13:20, , 9F
dNTP 則和 Mg++有關
02/02 13:20, 9F
→
02/02 13:38, , 10F
我老闆說他不知道捏~
02/02 13:38, 10F
推
02/02 13:51, , 11F
template 或是 dNTP 太多，會把反應中的 Mg2+ 搶走
02/02 13:51, 11F
→
02/02 13:52, , 12F
如果 [Mg2+] 不足，會影響 taq 專一性，甚至反應不能
02/02 13:52, 12F
→
02/02 13:53, , 13F
進行 (Mg2+ 是 cofactor)
02/02 13:53, 13F
推
02/02 17:14, , 14F
我以為是Mg太多才"加速但專一下降"
02/02 17:14, 14F
推
02/06 00:13, , 15F
我也以為鎂多 專一性降
02/06 00:13, 15F
‣ 更多 lulusa 的文章
文章代碼(AID): #1BPkytwt (Biotech)