[求救] 抽取核蛋白的問題 HEK293T SK-N-SH
各位朋友好 我第一次在這裡發文
最近在抽核蛋白的實驗 細胞株分別有HEK293 SK-N-SH 這兩種
抽完跑western的結果 抽不乾淨! 用actin來抗我抽完的核蛋白和質蛋白,看不出差異
我用的方法是細胞收下來後---> PBS wash*2 ---> hypotonic lysis buffer(1:10)--->
不vortex 放冰上30分鐘 ---> 離心留下pellet(細胞核蛋白) 上清液留下(細胞質蛋白)
---> 用high salt buffer ---> 放冰上30分中鐘 (每5分鐘vortex一下)--->離心
取上清液(核蛋白)
這是我的實驗流程,後來hypotonic 那一步驟做了兩次,核蛋白仍然抽不乾淨
不知道板上有沒有 抽過這兩種細胞株 核蛋白的朋友
可分享您使用的方法呢 我也不清楚我的問題出在哪
謝謝了!!
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