[求救] competent cell

看板Biotech作者 (柚子)時間16年前 (2010/01/23 00:13), 編輯推噓7(7推 0噓 8→)
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最近老師需要10的8~9次方的competent cell 但我怎麼做最好都只能到5*10的6次方 想請問 板友 大家養菌的方式跟OD值 看版 及書 大部份都養2小時就可以到0.5~0.6 但我養2.5小時卻只能到0.3~0.4 還有假如養 100ml 用250ml 養是不是會導致氧氣不足 我是用PSI broth (參考國外的protocol) 看網路上大家好像都用SOB 老師說用 PSI borth就可以在培養過程中 細菌細胞膜會變薄弱 另外 測效率的plasmid DNA 是否不能適用於不同的competent cell 因為我門實驗室用的competent cell有DH5a, ccdB, stbl3, HB101,JM109 但怎麼都做不好 拜託 高手教授我幾招 非常感謝!!!!!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 61.230.79.188
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01/23 00:25, , 1F
我們的protocol是有在subculture時加MgSO4
01/23 00:25, 1F
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01/23 00:56, , 2F
你罐子太小了 我們都養錐形瓶的1/5~1/4體積
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ex.5L瓶養1.25L或1L
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另外competent cell製作時的技巧會影響效率很大
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基本上製作competent cell時，菌會很脆弱，所以不能太劇
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烈，然後動作要快，要確實在冰上處理
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用電的
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01/23 22:23, , 8F
照openwetware上的TOP10方法做,沒冰近8次,有冰7次方出頭
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用電的可以到 10^10 效果好~~
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如果真的要求這麼高 用買的會不會比較省事又有保障啊?
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如果真要這麼高效率 我建議用買的= = 其實沒有很貴
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10^8 10^9已經是滿高等的 要制作要很小心
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除了含氧量以外 你養的轉速也要調整 讓他長好一點
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0.3-0.4就可以做了 不一定要到0.5
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我們家也是搖到OD值0.35就做囉～怕0.5的菌已經太老了
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