[求救] 組織萃取蛋白及western
最近在下的學妹在做研磨動物腎臟抽取蛋白及western
所用的方法是加 Thermo的T-PER下去研磨並萃取組織中的蛋白
western 的步驟是沒有太大問題，transfer 的條件無論是90V
1.5hr 或是25V O/N 都有試過，但是問題來了
她做出來中間的band 會比較淡或是不見
左右兩條(除了marker外的第一個和最後一個)會比較正常
在定量方面應該是OK的，跑膠的過程也看似正常
一、二抗的濃度或是搖擺方式也都跟我的一樣
所以我目前懷疑的是transfer 的時候是不是因為用來萃蛋白的buffer不同
(我是用RIPA)或是其他甚麼原因造成transfer 不完全呢?
因為他transfer 的時候我不在場，所以也不知到哪邊出了問題
請問大家有這樣的經驗或是知道該如何解決嗎? 感謝
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