[求救] 犧牲時灌流與否?福馬林固定的時間?

看板Biotech作者 (DanceHaHaHa)時間16年前 (2010/01/20 23:59), 編輯推噓2(205)
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請教板上大大 如果要做肝臟,腎臟,肺臟三種器官的石蠟切片, 而檢體日後要做western blot,HE染色,免疫組織染色, 這樣動物犧牲時需要先用PBS或福馬林灌流嗎? 我知道灌了福馬林,就不能做western blot了。 但不灌流,多餘的血液(由其是肝腎)又會影響實驗結果! 因此不知如何克服上述問題? 順道想請問如果要做石蠟切片的免疫組織染色, 檢體要泡在10%福馬林中固定多久呢?聽說泡太久會無法做免疫組織染色! 謝謝! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 218.164.147.192

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要不要灌流我沒做過不確定,但是肺臟要抽氣固定喔(要沉下去)
01/21 11:05, 1F

01/21 11:06, , 2F
我能想到的是灌iced PBS,灌完快點取組織丟到固定液去..
01/21 11:06, 2F

01/21 17:35, , 3F
我們家是先灌0.9%NaCl再灌4%PFA,灌過4%PFA之後已經fix了
01/21 17:35, 3F

01/21 17:37, , 4F
所以取樣的話就可以慢慢來~然後再泡4%PFA 4度C O/N~隔天
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01/21 17:38, , 5F
就切片在IHC,學長說fix太久不能作IHC喔!
01/21 17:38, 5F

01/22 10:39, , 6F
我都是以七天為期限 超過效果就會不好
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先灌PBS去除血液再灌PFA固定 取完泡4%PFA不超過2天
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