[求救] AT-rich PCR 無產物

看板Biotech作者blueashin (tRoMboNe pLaYer)時間16年前 (2010/01/19 18:45)推噓1(1推 0噓 9→)

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想請問各位高手我要擴增一段DNA片段前提是這組primer用於擴增該基因的cDNA是沒有問題的但是不知道為什麼用來擴增DNA的時候卻怎麼放都放不出來於是我分段來擴增這個基因沒想到分成兩段來擴增居然可以擴增出來問題來了我試圖把兩段用RE切斷然後接在一起再進行全長DNA擴增沒想到依然失敗後來把兩段分別定序確定是該基因沒錯也發現它的AT content大概是70% google了一下發現大家都用降低extesion溫度以及拉長extension時間來擴增這樣的片段於是我做了extesion temperature的gradient pcr 發現在extesion temperature=56時有我要的產物但我想再重複卻又不見了 QQ 實在很苦惱不知道有沒有人遇過這樣的事情感恩~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 210.241.123.131

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puec2

01/19 21:49, , 1^F

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blueashin

01/19 22:08, , 2^F

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推

singren

01/20 12:16, , 3^F

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