[求救] 請問WB 一抗或blocking可以放兩個o/n嗎?

看板Biotech作者 (sunshine after rain~~)時間14年前 (2010/01/06 19:05), 編輯推噓6(6推 0噓 8→)
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要作western blot 因為一些關係 儀器上可能禮拜一才能壓片顯影 但我禮拜五就想要跑膠transfer了 這樣的話 可以4度C blocking 兩個晚上 或是一抗放兩個晚上嗎? 我們一抗都有加NaN3當防腐劑 或甚至是 禮拜六日作到二抗加完反應完 然後membrane放在PBST中保存到禮拜一? 不知道有沒有人這麼做過? ^^" 謝謝~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.109.66.100
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transfer完就把membrane以塑膠膜包住用封口機封好，冰-20冰箱
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等確定機器好了再進行之後的步驟
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01/06 20:50, , 3F
只要你確定不會長菌~放2個o/n沒關係啦~
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blocking這樣放是沒問題的
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理論上是OK的
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blocking太久要注意奶粉沉澱的問題，我通常是一抗放兩個
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晚上，二抗放太久會很髒(依二抗種類不同有差)
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也試過Membrane泡buffer(TBS or PBS)放4度是OK的
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牛奶沈澱就挫賽了.我曾經有慘痛經驗 Orz
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PVDF的話記得手冊上應該有寫可以放乾用要前再用MeOH激活
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01/07 10:44, , 11F
transfer上protein後再放乾 之後還還能用MeOH激活 ?
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1抗放4度c兩天是ok的 但PBST泡太久訊號會變弱 不建議
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01/07 20:47, , 13F
嗯嗯 知道了 決定一抗4度C搖兩o/n 感謝大家!!
01/07 20:47, 13F
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1抗o/n(我用過3天)可以 但是blocking不建議 PBST尤其不建議
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