[求救] cPCR有東西, 卻養不出小量
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出
以方便板友幫您追蹤問題
----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章----
1. 用primer夾出target gene,跑 2% agarose gel. 確定target gene有被放大.
2. 做T/A clone, 使用promega的系統, inser(8.6ng),vector(25ng) (inser:~1.8kb)
(pGEM-T Easy Vector system, 帶有anti-ampicillin的gene)
3. ligation overnight後, transform到DH5a裡(heat shock:90sec, on ice: 30mins)
4. 加入500ul LB後, 於37度烘箱搖1hr. 之後取250ul塗盤(ampiillin: 100ug/ml)
5. 37度烘箱中培養14~16hr後, 挑菌做cPCR, 養小量(ampicillin: 100ug/ml)
6. 37度烘箱中搖14~16hr. 菌液依然清澈透明 "Orz
問題: 確定cPCR有我要的inser(表示有plasmid在), 可是卻養不出小量(菌液清澈透明)?
已經確定PCR system沒有被污染, ampicillin也是新鮮的.
P.S 第一次PO文, 有哪裡講不清楚的請提出, 我會再補上.
先謝謝各位了!
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.129.77.148
※ 編輯: chaunen 來自: 140.129.77.148 (12/07 23:54)
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