[求救] 關於C41(DE3) C43(DE3) 的transform

看板Biotech作者 (王楚)時間16年前 (2009/11/17 19:54), 編輯推噓0(006)
留言6則, 3人參與, 最新討論串1/1
最近由於實驗的需要 需要用到C41(DE3) 和C43(DE3)這兩種competent cell 需要同時transform兩個plasmid進到competent cell中 兩個plasmid分別帶有Amp和Kan resistant gene 之前co-transfoem到DH5a 和 BL21(DE3)中都非常順利 在含有Amp和Kan的plate上都長滿滿一盤 可是在C41和C43 competent cell卻發生問題 怎樣transform都沒有長出任何一顆colony 放冰上30 min heat shock完再用沒有抗生素的recovery medium養一小時再塗也是沒用 做的很灰心 完全不知道為什麼.... 不知道是否有人有遇過類似的情況 或是能夠提供小弟我一些建議 謝謝大家了~^^ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 118.168.32.194

11/17 20:48, , 1F
competent cell直接加medium會不會長
11/17 20:48, 1F

11/17 21:32, , 2F
C41/C43的competence比DH5α差,除了DNA稍多一點,這種co-
11/17 21:32, 2F

11/17 21:32, , 3F
之前有測試過 會~
11/17 21:32, 3F

11/17 21:33, , 4F
transformation的抗生素用量請減半,塞三個就用1/3,類推
11/17 21:33, 4F

11/17 21:33, , 5F
過去的經驗是兩個質體還能有幾十個,三個一起丟多半只有個
11/17 21:33, 5F

11/17 21:34, , 6F
位數,還不見得是真的(攤手),不趕就一個一個放囉
11/17 21:34, 6F
文章代碼(AID): #1B0ey6Ki (Biotech)