[求救] 利用tissue做comet assay
最近要進行comet assay彗星試驗
遇到困難...
因為以前在學校我都是用血液當sample
取白血球(cell)做comet
現在在公司,主管想要我利用tissue做這個實驗
(我擁有rat/mouse organ)
雖然comet assay的protocol上有註明
如何用tissue做這個實驗
但是我試的結果則是發現:
做tissue的前處理後,要拿sample去計數細胞
結果在顯微鏡下只有非常少量的cell(而且還是死的)
想問問有利用tissue做過comet assay的高手
可以幫我看看是哪個步驟有問題嗎?
謝謝^^
Tissue Preparation
1. Place a small piece of tissue into 1–2 ml of ice cold 1X PBS
(Ca++ and Mg++ free),20 mM EDTA.
這裡我剪了小鼠的肺一小塊在培養皿中,浸泡以PBS稀釋的20mM EDTA(體積1mL)裡
然後將這小塊tissue稍微剪一剪
2. Using small dissecting scissors, mince the tissue into very small
pieces and let stand for 5 minutes.
接下來就靜置5分鐘
3. Recover the cell suspension, avoiding transfer of debris. Count cells,
pellet by centrifugation, and resuspend at 1 x 105 cells/ml
in ice cold 1X PBS (Ca++ and Mg++ free).
之後取留在培養皿中的sample(就是步驟一浸泡lung tissue的solution)
0.01mL拿去計數細胞
結果卻發現... 細胞數量非常少(死細胞),不然就是非細胞樣子的碎片
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