[求救] 請問一下抽Gram positive細菌genomic D …

看板Biotech作者arzakiii (Duke. Bio)時間16年前 (2009/11/15 18:53)推噓3(3推 0噓 1→)

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各位好我實驗室主要操作的菌株是以放線菌中的Streptomyces為主現在實驗室主要抽取的方式是以CTAB法為主第一個問題是我們在破菌的時候使用液態氮研磨的方式會造成genomic DNA的斷裂雖然不會全部斷掉但是會影響到我們之後使用RE的判斷之前我們學長姐有試過不用液態氮研磨，只用化學藥劑的方式破菌將菌體加入lysis buffer (Tris、10% SDS、EDTA、2% Triton-X100) 額外加lysozyme 37度反應半小時但是不用液態氮破菌的效果真的是太差了第二個問題我們使用CTAB抽取出來的genomic DNA在跑膠的時候會看到agarose gel有拖尾的現象會從loading well裡面也會被染到老師是說DNA太髒但是我們都過幾次PCI還是一樣很髒不過我用RE切完以後就不會有脫尾現象想問一下有沒有方法可以改善的?? -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.136.180.113

推

vita895

11/15 20:13, , 1^F

11/15 20:13, 1^F

→

ROKEE

11/15 20:55, , 2^F

11/15 20:55, 2^F

老師希望SOUTHERN的DNA濃度要很濃會比較好 = =

推

kemp6611

11/15 23:29, , 3^F