[求救]transfection後蛋白質表現不出來

看板Biotech作者 (doskoi)時間16年前 (2009/10/15 05:17), 編輯推噓3(3推 0噓 5→)
留言8則, 6人參與, 最新討論串1/1
最近被這個問困擾了 我將plasmid transfect進293T後 用pcr可以測到mRNA表現 用western卻測不到protein的表現 如果排除掉mRNA sample被plasmid汙染和antibody有問題 還會有其他原因造成這個結果嗎? p.s.表現的基因是extracellular domain,並不是全長 不過我有去確認過antibody是用這段當antigen做出來的 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 114.45.70.57
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10/15 09:37, , 1F
Ctrl的情形呢? 是否其他細胞株、其他plasmid也這樣?
10/15 09:37, 1F
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10/15 09:37, , 2F
送進去的mRNA 有start coden嗎，in vitro可以合成protein嗎
10/15 09:37, 2F
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10/15 13:02, , 3F
建議測試一下antibody 曾有壞掉然後以為沒表現的經驗過
10/15 13:02, 3F
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10/15 15:34, , 4F
有START CODON...我先確認一下ANTIBODY活性好了
10/15 15:34, 4F
推
10/15 15:47, , 5F
那有stop codon!?in-frame?!先送sequence確定一下比較好~
10/15 15:47, 5F
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10/16 03:00, , 6F
stop codon, in frame 都沒問題...有送過定序
10/16 03:00, 6F
推
10/20 10:25, , 7F
Kozak sequence??
10/20 10:25, 7F
推
10/24 15:26, , 8F
有確認過此序列是否有in frame嗎？
10/24 15:26, 8F
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