[求救] RNA isolation 加錯東西

看板Biotech作者 (abc)時間16年前 (2009/09/30 05:21), 編輯推噓4(4推 0噓 9→)
留言13則, 4人參與, 7年前最新討論串1/1
我是用Trizol抽的 先說一下步驟 1ml Trizol到細胞pellet 200ml Chloroform 取上清液 加等體積isopropanal 離心留下pellet 酒精wash 回溶到50ul DEPC water+ DNase I+ RNase out incubation 30 mins -------------------------------------------------------------------------- 以上都沒有問題，接下來問題來了 一般接下來的步驟是+150 DEPC water, 然後加 Phenol/ Chloroform,/ iso amy alcohon (25:24:1) 200ul 可是我一時手誤，把本來該加的DEPC water加成了isopropanal 請問之後的離心，還是一樣會被分離在上層嗎？ (因為一般isopropanal是沈澱用的，可是p/c/i是將RNA 分離在上層上清液的） 如此一來，產物到底會在下層還是上層？ 有請高手幫忙解答一下，謝謝了~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 77.8.162.157
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10/01 02:23, , 1F
自己回答，後來我再多加入cloroform, 然後照去離心
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後續步驟照常，也有抽出來, quality 還ok
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10/02 02:12, , 3F
這個步驟很特別呢@@ 先沉澱處理RNase再分離
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推
10/02 02:13, , 4F
請問你萃取的是什麼細胞 這樣處理有什麼特殊目的嗎?
10/02 02:13, 4F
推
10/02 12:27, , 5F
+DNase因為他要做RT 所以把裡面DNA去除 這樣比較純吧?
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10/02 12:28, , 6F
然後RNase out 是怕他的RNA被分解 樓上是問這嘛
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推
10/02 14:14, , 7F
我是好奇為什麼會分兩次純化
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10/03 00:18, , 8F
因為要跑QPCR所以希望純度好一點，又沒有DNA 污染
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10/03 00:19, , 9F
近來前實驗室就用這個protocol, 只是很費時倒是
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10/03 00:21, , 10F
我是用Microglia, 不過後來產量都好少阿~~
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推
10/05 18:27, , 11F
我懂了 謝謝^^
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11/11 01:46, , 12F
請問你萃取的是什麼細胞 https://muxiv.com
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01/03 17:01, 7年前 , 13F
這個步驟很特別呢@@ https://noxiv.com
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