[求救] His tag 的純化

看板Biotech作者 (我要變直哉)時間16年前 (2009/09/27 02:04), 編輯推噓8(8推 0噓 16→)
留言24則, 8人參與, 7年前最新討論串1/1
發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出 以方便板友幫您追蹤問題 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- 大家好 小弟現在正在做 His tag的純化 目前實驗室用的 resign 是 GE的 STREAMLINE Chelating 需要自己binding上 Ni離子 看過paper 有寫到說是用0.2M的 NiSO4 溶液 但是 不確定是不是在open column的情況下做?? 另外 若是在這樣的情況之下 如何確認binding 上Ni的數量呢?? -- -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 114.43.9.71
推
09/27 13:48, , 1F
我的做法是：將resin注入column中，以大量水去清洗
09/27 13:48, 1F
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09/27 13:49, , 2F
加是2~3倍體積的NiSO4，再以大量ddH2O，注意一下resin的
09/27 13:49, 2F
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09/27 13:50, , 3F
顏色變化，然後再用平衡用的buffer 來平衡，即可使用
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09/27 13:52, , 4F
以上，提供你參考，其他方式，可以參考S或Q牌的
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09/27 13:53, , 5F
我記得產品書上好像有寫每ml的resin可以鍵結多少量的Ni
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09/27 13:54, , 6F
若沒有的話，直接問他們的產品專員，請他們寄給你
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09/27 13:55, , 7F
我記得...那專員(女) 聲音....不錯！
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09/27 14:12, , 8F
是直接用重力的方法嗎?? 可是實際上接上去的Ni會不一樣
09/27 14:12, 8F
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09/27 14:14, , 9F
所以 想計算實際接上Ni的濃度
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推
09/27 14:30, , 10F
我都是用重力純化
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09/27 14:59, , 11F
滴一些NaOH到廢液裡面 Ni好像會沉澱出來..烘乾稱重看看
09/27 14:59, 11F
推
09/27 15:14, , 12F
怎麼不用幫浦.....重力純化好浪費時間
09/27 15:14, 12F
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09/27 16:07, , 13F
我是想用AKTA那台機器 可是NiSO4好像不能通那台機器
09/27 16:07, 13F
推
09/27 23:44, , 14F
FPLC？！ 科科，我們家沒有這機器
09/27 23:44, 14F
推
09/28 16:14, , 15F
AKTA有內建His-tag purification program，其中有charge Ni
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09/28 16:14, , 16F
的步驟，是要通NiSO4
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推
09/28 16:16, , 17F
不過所有要上AKTA的buffer要通0.22um filter
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推
09/29 14:46, , 18F
為何要0.22um? 0.45的或0.90的不行嗎?
09/29 14:46, 18F
推
09/29 23:32, , 19F
.22可以濾菌 所以manual才會建議這樣 不過sample過.22不
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09/29 23:32, , 20F
好通的話.45也可以 太大會損壞機器
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09/29 23:34, , 21F
至於重力純化 其實可以接上一根syringe 有螺紋的...
09/29 23:34, 21F
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09/29 23:35, , 22F
慢慢通 大約數秒一滴的速率就夠了
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11/11 01:45, , 23F
FPLC？！ 科科 https://daxiv.com
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01/03 17:01, 7年前 , 24F
加是2~3倍體積的Ni https://daxiv.com
01/03 17:01, 24F
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