[求救] SiRNA transfection knockdown target gene的技術

看板Biotech作者 (快意)時間16年前 (2009/09/18 15:26), 編輯推噓5(5推 0噓 9→)
留言14則, 8人參與, 7年前最新討論串1/1
請問各位大大 我目前實驗主軸是 SiRNA的transdection 作 基因knockdown的實驗 使用的輔助劑是用 invitrogen買的 lipofatamine2000 條件基本上是抓 5 ul lipo + 2.5 ul SiRNA transfection 6hr後再加入30%FBS medium 我是做cell culture 的 SiRNA knockdown 但是knockdown的效果並不是很穩定..... 但是我又不能再換其他種的transfect方法 請問有人也有做過類似的實驗嗎 ? 請教各位了 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 211.76.175.170
推
09/18 16:05, , 1F
SEEDING細胞數量?VECTOR選定?PROMOTER選定?\
09/18 16:05, 1F
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09/18 16:44, , 2F
seeding數量約70~80%
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09/18 16:45, , 3F
transfection時 就加入 lipo and SiRNA 而以ㄋ
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09/18 16:45, , 4F
沒有放 promoter
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推
09/18 17:20, , 5F
細胞株?siRNA量?所謂的不穩定是...cell死很多?時好時壞?
09/18 17:20, 5F
推
09/18 18:11, , 6F
30%FBS好像太多了吧!他應該不是用vector或是promoter系統
09/18 18:11, 6F
推
09/18 19:18, , 7F
沒有放promoter???不穩定是用啥判斷？WB?PCR?
09/18 19:18, 7F
推
09/18 21:19, , 8F
沒有需要promoter啊 他是用siRNA不是shRNAi
09/18 21:19, 8F
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09/18 21:19, , 9F
你是transfect什麼樣的細胞會有影響
09/18 21:19, 9F
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09/18 22:39, , 10F
經驗發現transfection 6hr換serum-free media,knockdown
09/18 22:39, 10F
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09/18 22:41, , 11F
效果最穩定. 還有會連續做兩次siRNA transfection,
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09/18 22:42, , 12F
中間隔兩天
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11/11 01:45, , 13F
transfectio https://noxiv.com
11/11 01:45, 13F
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01/03 17:01, 7年前 , 14F
你是transfect https://noxiv.com
01/03 17:01, 14F
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