[求救] 蛋白質沉澱

看板Biotech作者 (自由 呼吸 存在)時間16年前 (2009/09/11 16:57), 編輯推噓4(4推 0噓 5→)
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目前採用硫酸銨來做蛋白沉澱 蛋白質原先存在一般的lysis buffer中 加入硫酸銨(80%) vortex 15 min 離心12000 rpm 30 min 4度下 但是無法順利取得沉澱 蛋白質全都浮再上面... 離更久也是 請問有人知道如何解決嗎? 感謝~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.109.54.2
推
09/11 17:11, , 1F
把硫酸銨慢慢滴進去一邊stir(4度C)看看
09/11 17:11, 1F
推
09/12 02:59, , 2F
硫酸銨要邊stir邊慢慢加入 注意局部濃度不要過高
09/12 02:59, 2F
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09/12 03:00, , 3F
如果buffer表面有泡狀漂浮物,表示硫酸胺加太快讓蛋白變性了
09/12 03:00, 3F
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09/12 03:20, , 4F
剛開始做的話，建議依照飽和濃度來分段加。
09/12 03:20, 4F
推
09/12 12:41, , 5F
4度C邊stir邊慢慢加入+1,我加完還會stir個2hrs,之後離心
09/12 12:41, 5F
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09/12 12:41, , 6F
19000rpm,30mins
09/12 12:41, 6F
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09/12 12:42, , 7F
vortex不知道好不好耶,stir可能比較好吧!!
09/12 12:42, 7F
推
09/13 01:26, , 8F
不要依賴RPM, xg比較準確
09/13 01:26, 8F
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09/14 02:18, , 9F
加完硫酸銨有白色固體出現嗎？感覺懸浮物不是蛋白質的說
09/14 02:18, 9F
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