[求救] 為什麼送定序回來,F跟R還是不一樣?

看板Biotech作者 (花套牙)時間16年前 (2009/09/09 17:49), 編輯推噓6(609)
留言15則, 8人參與, 7年前最新討論串1/1
我想問的是, 把同一支菌(從single colony養出來的三區)送insert的定序, 理論上foward和reverse只是從double strand的兩端讀過去和讀回來而已不是嗎? 可是為什麼allign foward sequence和reverse sequence的時候, 兩者還是有些微差異呢? 反請各位大大位我解惑,謝謝ˊˋ -- 寬恕是病人與上帝的事,我的工作是安排他們見面 By 波波 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 211.76.93.122

09/09 18:29, , 1F
"些微"是什麼??是不是太長了?所以沒有overlap
09/09 18:29, 1F
有,大部分都overlap, 像這樣 forward ____________________________________ reverse ______________________________________ ↑ 可是中間的部份有的就有一兩個(單獨的)對不起來, (比如像箭頭處) 可是蛋白質要轉譯一個都不能不一樣阿ˊˋ 為什麼會這樣? ※ 編輯: toiot 來自: 211.76.93.122 (09/09 18:39)

09/09 19:35, , 2F
sequence error 兩端讀總會有一小部份不同
09/09 19:35, 2F

09/09 20:02, , 3F
要看一下定序後的圖比較準~~有時訊息太弱或重疊會"誤判"~
09/09 20:02, 3F

09/09 20:05, , 4F
了解,謝謝~
09/09 20:05, 4F

09/09 22:45, , 5F
借標題請問一下..會有可能是point mutation嗎?
09/09 22:45, 5F
※ 編輯: toiot 來自: 211.76.93.122 (09/09 23:08)

09/09 23:53, , 6F
Taq酵素在複製DNA時有時會出錯,而造成DNA序列突變(錯誤)
09/09 23:53, 6F

09/09 23:54, , 7F
所以通常需要二重複到三重複的定序結果去檢視之..
09/09 23:54, 7F

09/10 08:10, , 8F
重新做clone,還有請愛用pfu...
09/10 08:10, 8F

09/10 14:38, , 9F
如果真的是point mutation ,定序回來的Forward和Reverse序
09/10 14:38, 9F

09/10 14:40, , 10F
列,overlap處 理應會match,只是定出的序列與wild type序列
09/10 14:40, 10F

09/10 14:41, , 11F
會不一樣
09/10 14:41, 11F

09/10 14:42, , 12F
簡單的說 若發生point mutation理應不會出現定序不match
09/10 14:42, 12F

09/10 14:43, , 13F
的問題
09/10 14:43, 13F

11/11 01:43, , 14F
簡單的說 若發生poi https://daxiv.com
11/11 01:43, 14F

01/03 17:00, 7年前 , 15F
所以通常需要二重複到三 https://muxiv.com
01/03 17:00, 15F
文章代碼(AID): #1AfteO2q (Biotech)