[求救] western blot壓collagen

看板Biotech作者 (對的人~*)時間14年前 (2009/09/08 22:20), 編輯推噓5(5推 0噓 10→)
留言15則, 8人參與, 5年前最新討論串1/1
最近用western blot壓cell lysate內的collagen 每well loading 30ug 同時壓tubulin當control 結果collagen 都一片空白，tubulin濃到membrane都焦黃了 我用的一抗(collagen)是用santa cruz 比例 1:200 4度C overnight 此抗體的data sheet上寫著適用WB,卻沒show出結果data 目前實驗室內沒人用此抗體作western, 所以無從比較 (此抗體是現有的) 跟santa cruz反應，它叫我用1:100 和load到60ug 對於它的建議，我實在很困惑，真的需用到1:100這麼高嗎? load 60這個，因為收下的protein濃度約為 2ug/ul,要load到這麼多，實在load不進去 想請問，有哪裡是我沒注意到的嗎? 我真的想破頭了 感謝! p.s.對於換另一支抗體,因為我們不是學術實驗室,沒有很肯定work的話, 比較無法要求買抗體來試,只能用現成的抗體作 -- 在我對的時間遇到對的你 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 114.39.149.64
推
09/08 23:40, , 1F
啊你沒有先查previous publication 有哪隻ab可染
09/08 23:40, 1F
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09/08 23:40, , 2F
然後買那隻
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推
09/09 06:44, , 3F
你抗體濃度高到不可思議
09/09 06:44, 3F
推
09/09 10:22, , 4F
聖誕老公公都建議用這麼高..
09/09 10:22, 4F
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09/09 10:23, , 5F
你是壓哪一個COLLAGEN阿..COLLAGEN有20幾種喔!!
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09/09 10:23, , 6F
還有..你的細胞會表現collagen嗎??
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09/09 10:24, , 7F
這是我之前detect collagen的經驗啦!!
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09/09 10:27, , 8F
有帶positive control嗎?
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09/10 20:41, , 9F
我買sc-80760那支. cell是fibroblast
09/10 20:41, 9F
推
09/13 20:20, , 10F
有的western的條件就是不好找阿 爬文 然後慢慢試各個可能
09/13 20:20, 10F
推
10/11 17:54, , 11F
抗體用的比我還高...我用1:5000 collagen I可以跑的出來
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10/11 17:55, , 12F
我是用SC-59772這支的
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10/11 18:01, , 13F
建議不要用Tyrspin取lysate 這種細胞容易被刮去ECM
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11/11 01:43, , 14F
我買sc-80760那 https://daxiv.com
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01/03 17:00, 5年前 , 15F
有的western的條 https://muxiv.com
01/03 17:00, 15F
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