[求救]透析&濃縮

看板Biotech作者 (鳥蛋)時間16年前 (2009/09/03 00:41), 編輯推噓4(4推 0噓 12→)
留言16則, 9人參與, 7年前最新討論串1/1
這陣子都在將純化的GST fusion protein做透析和濃縮 elution buffer: 30mM Reduced Glutathione 100mM Tris-HCl pH=8.5 1% Triton X-100 純化完都是直接凍-80度 透析是用1x PBS 換3~4次 但是不論在濃縮或是透析都會出現蛋白質沉澱 我想請問版友們 有什麼方法可以解決 目前只有想到是否是因為濃度過高(後續實驗是比較希望能高一點) 感謝!! -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 61.227.128.239
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09/03 02:14, , 1F
透析是在冷凍前還是後?
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09/03 09:05, , 2F
冷凍後
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09/03 09:59, , 3F
protein冷凍解凍易造成變性沉澱。直接就去透析如何?
09/03 09:59, 3F
推
09/03 10:36, , 4F
我們也都是純化完直接透析 再看情況是否要濃縮
09/03 10:36, 4F
推
09/03 13:06, , 5F
有些蛋白本來就會沉澱 case by case
09/03 13:06, 5F
推
09/03 13:59, , 6F
我的是透析過程會有大量澱，應該是salt-in -out的問題吧？
09/03 13:59, 6F
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09/04 02:35, , 7F
樓上正解
09/04 02:35, 7F
推
09/04 22:58, , 8F
protein的pI跟buffer pH？
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09/04 23:57, , 9F
直接透析感覺效果不錯 那是之後都不能冷凍的意思嗎?
09/04 23:57, 9F
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09/04 23:59, , 10F
請問pH和pI會如何影響呢? 謝謝:)
09/04 23:59, 10F
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09/05 00:14, , 11F
我們protein也不敢凍 只冰4度 pH若在等電點易沈澱
09/05 00:14, 11F
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09/05 00:16, , 12F
salt-in -out沈澱出來的protein 不是溶的回去嗎??
09/05 00:16, 12F
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09/07 21:11, , 13F
有些蛋白質需要有一點鹽濃度才會溶，所以透析後的鹽濃度
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09/07 21:11, , 14F
過低，這些原本因鹽濃度高溶解的蛋白質就又析出了
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11/11 01:43, , 15F
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01/03 17:00, 7年前 , 16F
protein冷凍解凍 https://noxiv.com
01/03 17:00, 16F
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