[求救] ELISA 讀值微弱
想請問版上的各位前輩，我最近開始做VEGF的測定，使用的是snadwich ELISA。
前幾次做的時候還ok，標準曲線的最高濃度(2000 pg/ml)有約0.8的ABS(說明書上約
在ABS 2~3間)，但是之後的ABS突然變很低(ABS 0.52)。
步驟順序沒錯，時間也差不多。濃度都如說明書上建議的配，Wash buffer自己配。
我懷疑會不會是PBS擺太久，但測得的pH在7.3左右。
還是Tablet PBS(第一次ELISA時配的)和自己配的差別很大?
另外想請教前輩們，PBS對於ELISA的影響會很劇烈嗎？或是有什麼是曾經遇過會
影響結果的小細節。感激不盡阿..try error已經兩個禮拜了..
註:kit是Human VEGF:DY293B (R&D)
Reagent Diluent: DY995 (R&D)
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