[求救] real-time RT-PCR 定量RNA
借朋友哀低PO的...
最近要做病毒RNA的定量 但遇到了一些瓶頸....
請各位高手能給予指教
1. 使用的引子是參考paper的，但做出來的slope都在4以上(R=0.99~1)，這樣
PCR效率就會降低，另外還有primer dimer在低病毒量會出現的問題，那
這樣的方法還適合用來做絕對定量嗎?? (detection limite 會不會不夠敏感??)
2. 檢量線的部分我查過paper，大部分是用in vitro transcription的方式製備
RNA 來當standard，有人試過直接抽病毒RNA當standard嗎??(若是以抽病毒RNA kit
去抽的話，是不是就一定不會抽到細胞本身的RNA)
3. TOPO-T-vector和pGEM-TEasy vector哪一種比較好做?
不知道大家看不看的懂我想問的問題@@"
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