[求救] RACE的相關問題
我最近再做RACE
因為想看兩個基因的translocation
其中有一個positive control (A基因+B基因 都是已知的了)
我用的是invitrogen generacer
但是很奇怪的是
我clone完之後定序
80%都是wild type(只有A基因)
但是當我用設計primer在A和B去做普通的PCR
是可以得到漂亮的band
這個positive control是cell line
照裡說應該是一半是wild type一半有translocation
當然做完2 step RT-PCR的時後
只有得到一條band
學姐說應該要得到至少兩條才對
(一條正常 一條translocation 可能還有一些non-specific)
不知道要怎麼改善PCR條件
嘗試降低annealing temperature
還有其他方法嗎
謝謝!
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