[求救] 二維電泳的電流

看板Biotech作者 (用力活著)時間16年前 (2009/08/02 00:34), 編輯推噓4(4推 0噓 17→)
留言21則, 7人參與, 7年前最新討論串1/1
最近在跑二維電泳 結果經過染色之後幾乎沒有點@@ 而且marker的部份也跑出來怪怪的 在蛋白質定量的時候都有測出濃度 所以我想是不是跑到跳海了呢? 我跑的條件是: 200V 90mA (兩片膠) 跑5個小時(是不是電流太高呢?) 目前想說如果要重跑的話 再跑SDS的時候以Agrose 封膠的時候是不是可以在裡頭加一點dye 或是在平衡IPG strip的最後一步(Buffer II 加完) 加一點dye 以免跳海發生 因為我是使用Bio rad的系統 想請問一下有在使用的版友能不能給點建議 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 118.165.230.95
→
08/02 00:51, , 1F
13 公分 一片最高到 25 mA 4~5小時
08/02 00:51, 1F
推
08/02 01:32, , 2F
問題可能很複雜 建議找身邊有經驗的幫你解決
08/02 01:32, 2F
→
08/02 04:00, , 3F
記得有建議是(26cm)每張1.5W左右 我想要注意過程變化
08/02 04:00, 3F
→
08/02 04:01, , 4F
通常以agarose封膠條時是有含bromophenol blue的
08/02 04:01, 4F
→
08/02 04:02, , 5F
我的經驗是其過程中的buffer都是含有blue的
08/02 04:02, 5F
→
08/02 04:03, , 6F
我主要是GE系統的經驗 但是應該大同小異 請多詳閱說明書
08/02 04:03, 6F
推
08/02 14:04, , 7F
蛋白質load多少？用啥染色？其實在agarose裡加dye就可以了
08/02 14:04, 7F
→
08/02 14:06, , 8F
我也是用BioRad，我一片膠40mA(2nd stage)
08/02 14:06, 8F
推
08/02 16:12, , 9F
可以在上面+dye你load多少?怎樣的染色?你確定你的染色
08/02 16:12, 9F
→
08/02 16:13, , 10F
前人是OK到你就不可以嗎?我也用BIORED的 我們100 ug就可
08/02 16:13, 10F
→
08/02 16:13, , 11F
看的很清楚 有聽過學姐說過 用CBB染色 有人load 500 ug
08/02 16:13, 11F
→
08/02 19:02, , 12F
我是load 500ug 用CBB染色 這次跑兩片膠 會不會是電流太
08/02 19:02, 12F
→
08/02 19:03, , 13F
高的關係@@
08/02 19:03, 13F
推
08/03 13:59, , 14F
你們那沒有dye可以加嗎?
08/03 13:59, 14F
→
08/03 14:01, , 15F
真的沒有的話@@"，仔細看可以看到gel裡有1-2條分界線
08/03 14:01, 15F
→
08/03 14:02, , 16F
那大約是front的位置，我跑20x20的gel大約3-4h結束
08/03 14:02, 16F
→
08/03 14:03, , 17F
若你跑較小的話可能一半都跳海了，另外500ug Comassie是
08/03 14:03, 17F
→
08/03 14:03, , 18F
ok的，用colloidal coomassie可以看到更多
08/03 14:03, 18F
→
08/03 14:05, , 19F
不過500ug大概只能看到含量中等以上的蛋白質吧
08/03 14:05, 19F
→
11/11 01:39, , 20F
記得有建議是(26cm https://daxiv.com
11/11 01:39, 20F
→
01/03 16:59, 7年前 , 21F
不過500ug大概只能 https://muxiv.com
01/03 16:59, 21F
‣ 更多 yangkoumi 的文章
文章代碼(AID): #1AT6wBrT (Biotech)