[求救] 在Competent cell的製備過程會不會導致plasmid的遺失?

看板Biotech作者 (歸蝶)時間16年前 (2009/07/17 01:47), 編輯推噓3(304)
留言7則, 5人參與, 最新討論串1/1
大家好,小弟想請教一個問題, 最近我想要將一個plasmid A送入DH5a E.coli中, 並且想要將這個含有plasimd A的DH5a製備成Competent cell, 這是為了將另一個plasmid B再送入這個含有plasimd A的DH5a中。 並讓plasmid A與plasmid B共同在DH5a中複製與表達。 而小弟的問題是, 第一, 當我將這個含有plasimd A的DH5a製備成Competent cell的過程中, 會不會導致plasimd A的遺失? 第二, 如果上述的plasimd A在不會遺失的情況下, 那我在製備Competent cell的bacteria culture中, 有沒有必要加入抗生素來確保plasimd A不會被丟掉? 麻煩請有這方面經驗的前輩可以幫幫忙, 謝謝。 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.116.94.144

07/17 02:28, , 1F
1.不會 2.通常活化菌隔夜時需要加,當天製作時的養菌不用加
07/17 02:28, 1F

07/17 02:29, , 2F
不過最後挑菌的話記得A質體的抗生素要加
07/17 02:29, 2F

07/17 02:30, , 3F
為什麼不AB一起做transformation再double selection?
07/17 02:30, 3F

07/17 02:52, , 4F
兩個質體能相容的話一起送就ok了吧 篩選一下應該會中
07/17 02:52, 4F

07/17 05:22, , 5F
感謝樓上各位^_^,因為實驗需求必須以A為背景再將B送進去
07/17 05:22, 5F

07/17 08:45, , 6F
不太懂 以A為背景? 不是都同一種菌株嗎? 只是帶了A
07/17 08:45, 6F

07/17 08:46, , 7F
歐 看懂了= =...你要以A存在下當背景..
07/17 08:46, 7F
文章代碼(AID): #1ANsVCUn (Biotech)