[求救] 抽RNA後的風乾如何做的?

看板Biotech作者 (蚊子)時間16年前 (2009/07/12 18:26), 編輯推噓8(8推 0噓 17→)
留言25則, 14人參與, 7年前最新討論串1/1
我又來啦~~ 想請問大家關於抽RNA的問題 我是用TRIzol抽total RNA 在最後面我用75%酒精洗過後 用tip去除液體 就打開蓋子放在laminar flow裡面吹15分鐘 但是測量OD值吼似乎都偏低 細胞數用的很多 RNA量應該不會只有這樣ˊˋ 沉澱後的pellet也很大坨 但是值卻很低...不知道是什麼問題 想問問大家在最後的風乾動作是怎麼做的呢?? 我有同學是包在塑膠袋裡面放烘箱 但因為是公用的烘箱常常沒有位置... 不知道有沒有更好的方法呢?? 拜託了<(_ _)> -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 220.129.153.236
推
07/12 19:10, , 1F
加完DEPC水後 置入溫水浴槽(50度) 5分鐘幫助沉澱溶解
07/12 19:10, 1F
推
07/12 19:12, , 2F
我們是會回溶O/N
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推
07/12 20:14, , 3F
我覺得 是你前面的步驟問題耶~
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07/12 20:15, , 4F
你要不要把你的實驗步驟全寫出來看看~
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07/12 20:16, , 5F
還有 我通常不用tip去吸取殘留液體 我都是用一張衛生紙
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07/12 20:16, , 6F
我也覺得是之前步驟出問題，在分層抽取的步驟損失太多?
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07/12 20:17, , 7F
鋪著 然後盡量把它倒乾(毛細現象) 而且 酒精不能全乾
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07/12 20:17, , 8F
剛又看到你說pellet很大，去酒精時有被你吸掉嗎?
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07/12 20:18, , 9F
如果酒精全乾的話 不好回溶喔 我記得 protocol上有說~
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還是你沒溶好，我都放4度C overnight
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07/12 21:26, , 11F
我是抽風櫃內15分左右 之後加DEPC水後放冰上個30分鐘
07/12 21:26, 11F
推
07/12 21:45, , 12F
你是用多少細胞抽RNA 多少DEPC去溶？ 有跑過gel check嗎？
07/12 21:45, 12F
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07/12 22:40, , 13F
用tip吸的話最後剩個30~50ul，用 flow抽氣吹乾，也不可以
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07/12 22:41, , 14F
也不可以全乾，不然很難回溶。確定pellet都有回溶！！！
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推
07/12 23:03, , 15F
我都是倒扣在bench上放個三鐘回溶 你會不會回溶水太多?P
07/12 23:03, 15F
我都用25T滿滿的細胞下去抽，用酒精洗後白色的沉澱物蠻大坨的 回溶用20ul滅菌水，轉低速votex @@ 大概是這裡出錯嘛? ※ 編輯: lydiayeh 來自: 220.129.143.186 (07/13 07:37)
推
07/13 14:47, , 16F
滅菌水?應該是DEPC水吧 會不會根本就RNA被吃掉了
07/13 14:47, 16F
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07/13 20:37, , 17F
15分鐘太乾了，我都是用tip把水珠吸乾淨室溫放五分鐘就回溶
07/13 20:37, 17F
推
07/14 02:04, , 18F
我的作法也跟 puec2大類似 但是我大概吸完 室溫dry個2-3分
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07/14 02:04, , 19F
鐘就乾了 就趕緊加水回溶
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07/14 02:11, , 20F
那如果已經幾乎乾掉了怎麼辦??
07/14 02:11, 20F
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07/22 23:32, , 21F
憶體可以用倒的基本上他不會掉下來 在倒放在架子上風乾
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07/22 23:32, , 22F
值很低有多低啊???total RNA 1.7以上就不錯了
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07/22 23:33, , 23F
如果太乾會因為pellet溶不掉而讓值整個變很低喔!!!!
07/22 23:33, 23F
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11/11 01:35, , 24F
也不可以全乾，不然很難 https://muxiv.com
11/11 01:35, 24F
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01/03 16:57, 7年前 , 25F
我們是會回溶O/N http://yofuk.com
01/03 16:57, 25F
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