[求救] siRNA knockdown後的functional assay

看板Biotech作者 (123)時間15年前 (2009/07/10 22:03), 編輯推噓1(1推 0噓 5→)
留言6則, 4人參與, 最新討論串1/1
siRNA 是買Dharmacon的smart pool 大約在48hr target gene 的 mRNA 約可 knockdown 50% 若要做functional assay ex:cell proliferation(MTT)....等等 時間點勢必要再拉長,但cell line會不斷的proliferation 但 隨著cell的proliferation 有被knockdown的比例就變少了 不知各位是如何去assay siRNA knockdown之後的function (主要是與cell proliferation相關,如MTT,colony..等, 而先前用加藥的實驗發現某些基因會down regulation) 還是用lentivirus的knockdown系統比較好 謝謝!! -- ※ 編輯: snkre 來自: 140.112.130.37 (07/10 22:03) ※ 編輯: snkre 來自: 140.112.130.37 (07/10 22:08)
→
07/10 22:25, , 1F
之前進行基因knowndown的分析都是選殖出stable knowndown細胞
07/10 22:25, 1F
→
07/10 22:25, , 2F
transient的方式比較沒辦法assay唷
07/10 22:25, 2F
推
07/10 23:59, , 3F
TRANSIENT時間點抓好照做啊~只是STABLE是最理想的而已
07/10 23:59, 3F
→
07/11 00:00, , 4F
PAPER也很多都是TRANSIENT做的~沒什麼不可以
07/11 00:00, 4F
→
07/11 22:13, , 5F
可以每隔2-3天用追加siRNA的方式嗎?paper中是沒有特別提到
07/11 22:13, 5F
→
07/12 00:26, , 6F
追加可.要記得做realtime PCR確定knockdown efficiency.
07/12 00:26, 6F
‣ 更多 snkre 的文章
文章代碼(AID): #1ALqeZjW (Biotech)