[討論] Western blot同批sample跑出來結果不同的原因

看板Biotech作者 (贏了世界又如何)時間15年前 (2009/07/03 19:00), 編輯推噓2(204)
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同事問我,為什麼同一批sample,同樣的條件與實驗流程 做出來趨勢為什麼在兩次WB的結果趨勢會不太一樣?? 比方說做第一次是 (一次做兩片,兩片趨勢一樣) 1 3 4 4 2 2 3 (數字表示band的強弱排序) 第二次是 1 2 4 2 4 2 2 慘一點就是同個tank裡兩片的趨勢就不同了... 整個實驗流程都沒有遇到任何問題,band的形狀,background也再美不過... 就是趨勢不穩 不知道這樣講大家有沒有看懂我描述的?? 我是跟他說,可能是在呈色時的反應不均... 他的呈色方式是 ECL反應1min後 用兩片濾紙吸乾,放到夾鍊袋裡去拍冷光.. 因為ECL已經被吸乾,所以不管曝光多久,亮度都不會變 (當然太短拍不到) 拍5min跟10min都一樣,只是10min顆粒比較細 不知道是否還有其它原因?? 請大家賜教一下~~謝謝~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 192.192.93.160

07/04 01:55, , 1F
我覺得跟protein定量關係比較大
07/04 01:55, 1F

07/04 10:27, , 2F
嗯..他的同一批就定量一次,配成同濃度一大管,跑個2~3重覆
07/04 10:27, 2F

07/04 12:30, , 3F
配成一大管取之前記得搖均勻(切身經驗....
07/04 12:30, 3F

07/04 18:48, , 4F
嗯,他說他都有vortex再spin down
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07/05 23:11, , 5F
我比較想知道是差多少....western畢竟只有半定量,差距太小
07/05 23:11, 5F

07/05 23:12, , 6F
的話實在不可信.....
07/05 23:12, 6F
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