[求救] 有人跑過超大分子量的WB嗎?

看板Biotech作者 (慧慧林)時間15年前 (2009/06/27 00:01), 編輯推噓6(6推 0噓 15→)
留言21則, 7人參與, 5年前最新討論串1/1
請問如果要跑350kDa的分子量 該怎用何種條件 因為 現在應該沒有如此大分子的marker吧 要怎嚜比對 是否是要跑大片膠 然後用 7%的gel呢? 有人有做過類似的實驗嗎?? 可以提供一下嗎 真是束手無策 謝 發問時請注意，若是要問實驗相關的問題，請將實驗的步驟、所用的條件大致列出 以方便板友幫您追蹤問題 ----請將上列注意事項以 ctrl + k 刪除後開始編輯文章---- -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 114.38.224.104
推
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先gel filtration完再跑?@_@
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可以提供清楚一點點嗎?謝謝
06/27 00:12, 2F
推
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我跑460kda,370kda的直接用7% mini-gel即可,不過marker是很
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大問題,市面上看過最大是300kda而已
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不過paper常看到的濃度是4.5%~7%之間,跟實驗目的有關
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推
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350...BRCA嘛XD?
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推
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不對 這東西比較像ATM...
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條件的話跑膠通常不是問題 因為%低就會下來 不過低於
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4%就不太會凝了 比較會有問題的是transfer buffer
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自己配的可能要去找轉高kD的配方 (我自己試過好幾種
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都沒用 最後只好放大絕用commercial..一次就成功)
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一般的Tris-Glycine+10~20%MeOH,Volt不要太高,像是60V/4h或
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20~30V,o/n都很ok,如果用Amp也差不多,會做不順還是要慎選Ab
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Tris-Glycine+20%MeOH是標準buffer..不過用過100V/5h
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還是一樣空蕩蕩 加了微量SDS也是...
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推
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跑大分子的transfer不是要降低MeOH 提高一些SDS嗎??
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06/28 21:02, , 17F
我就是要跑AMP,用6%膠跑可以嗎? 一定要大膠嗎?
06/28 21:02, 17F
推
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幹麻不用~agarose跑
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我家550KDA用0.5趴agarose~~~~膠很脆弱~
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自己配的可能要去找轉高 https://daxiv.com
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01/03 16:56, 5年前 , 21F
一般的Tris-Gly http://yofuk.com
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