[求救] 補平之後的ligation

看板Biotech作者 (比別人程度差就要更努力!)時間15年前 (2009/06/25 10:45), 編輯推噓4(4推 0噓 5→)
留言9則, 6人參與, 最新討論串1/1
補平和ligation之後 都只長少少的一兩顆 今天多了一點 只長五顆 可是都挑不到 想請問 補平之後的ligation有啥秘方嗎??可以讓我接多一點~ -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 140.109.65.34
推
06/25 10:46, , 1F
單邊補平？二邊？ ligation多久？溫度？
06/25 10:46, 1F
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06/25 10:49, , 2F
單邊補平 一邊是XhoI ligation一小時 室溫
06/25 10:49, 2F
推
06/25 12:01, , 3F
品質高的competent cell..
06/25 12:01, 3F
推
06/25 15:38, , 4F
ligation RT 1hr...你對你的ligase真有信心..
06/25 15:38, 4F
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06/25 15:38, , 5F
一邊blunt end 一邊sticky end應該不會太過難接
06/25 15:38, 5F
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06/25 15:39, , 6F
試試看把ligation時間拉長點看看 可考慮4度冰箱擺隔夜
06/25 15:39, 6F
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06/25 15:40, , 7F
當然competent cell的品質影響也是很大 也可以試試
06/25 15:40, 7F
推
06/25 16:12, , 8F
室溫ligation還ok呀 不然試試16度overnight
06/25 16:12, 8F
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07/14 19:21, , 9F
How long did you treat your DNA by klenow fragment??
07/14 19:21, 9F
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