[討論]請問哪個e.coli strain比較不會自己剪切plasmid?
事情是這樣的
我construct一個大約１４.5kb左右的plasmid transformt到DH5a後挑出
第一天養個幾cc做確認時沒有發現任何雜plasmid
第二天,拿一點第一天菌做subculture後抽plasmid發現會出現雜plasmid
1.拿第二天的菌做streak,可以分離出我要的plasmid跟雜plasmid
分離出的菌再經過第1天的培養確認,沒再出現雜plasmid,但再養第二天時
那雜plasmid就又出現了
2.雜plasmid切出來的BAND都與前一天結果一樣,但我沒個別分離出來抽plasmid確認,
只是與我要的plasmid混在一起看的,能辦認出的酵素除了single cut外
只有另外二個酵素
許多酵素切出來的長度幾乎是重合的,但是如果經過第三天的培養後
可看出一些低bp的BAND會比高bp的BAND還亮
所以我想有可能是菌自己剔掉的
這部份是否有可能?
3.有用plasmid另外transform一次,但結果跟streak一樣
4.LB方面應該沒汙染,人為操作方面就不太確定了
5.假如我推測沒錯的話,有哪些strain比較不會剔plasmid呢?
我的construct有PGK,Neomycin,polyA,SV40polyA,rabbit B-globin polyA
loxP,我的基因,其他genome序列,
6.還有哪些情況會導致我這結果發生?
--
※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.130.98.94
推
06/23 20:08, , 1F
06/23 20:08, 1F
→
06/23 20:08, , 2F
06/23 20:08, 2F
推
06/23 22:36, , 3F
06/23 22:36, 3F
→
06/23 22:38, , 4F
06/23 22:38, 4F
→
06/23 22:39, , 5F
06/23 22:39, 5F
推
06/23 23:25, , 6F
06/23 23:25, 6F
→
06/23 23:26, , 7F
06/23 23:26, 7F
推
06/23 23:52, , 8F
06/23 23:52, 8F
推
06/24 02:24, , 9F
06/24 02:24, 9F
→
06/24 02:26, , 10F
06/24 02:26, 10F
→
06/24 02:26, , 11F
06/24 02:26, 11F
推
06/24 11:53, , 12F
06/24 11:53, 12F
→
11/11 01:32, , 13F
11/11 01:32, 13F
→
01/03 16:56,
7年前
, 14F
01/03 16:56, 14F