Re: [方法] 我想請問一些有關於ELISA (TNF-ALPHA)_ …
※ 引述《takumatw (那粒颱風)》之銘言：
: 我是第一次做ELISA 附近沒人做對這實驗的樣貌不清楚,kit是之前實驗室的人留下的,
: 行蹤不明
: 所以我想問一些很基本的問題
: 我使用的是HUMAN TNF-a ELISA kit (pierce)
: 細胞是U937 懸浮型 加藥treatment後測 TNF-a
: 1.TNF-a 是應該要存在於細胞上清液中嗎??如果是,我應該用什麼離心條件取得上清液
: 300xg 5min ???
理論上是存在細胞上清液沒錯，可以把整個96-well plate拿去離
只要確定可以把細胞離下來就ok吧 但要小心別把細胞離破XD
300g 5min 可以吧
: 2.每一種sample要做2重覆,這2重覆應該是指同時準備2盤同樣的細胞加同樣濃度的藥
: 分別取1次上清液共(2個sample)??這樣說對嗎???還是同一細胞上清液取2次就好?
我通常是做三重複耶，重複是指在同一盤plate上進行，三重複就是做3個well，收三個
well的上清液
: 3.根據說明書,應該是它附的96well plate上有coat 某種東西抓得住sample的TNF a
: 再以biotinlated antibody抓TNF a 再以Streptavidin-HRP Reagent抓biotin最後以
: TMB呈色
: 我這樣對這原理的理解有誤嗎???
噢...原理部分請其他人補充吧^^
: 4.大家在wash well之後,是怎麼把washing buffer 抽出來,直接倒掉再甩一甩嗎??
我是直接到掉甩一甩0.0
: 5.我怎麼知道實驗準不準確或成功???
看你標準曲線做的如何 然後每個三重複結果是否相近
標準曲線沒做好就白做了~
: 6.如果plate用完了,但是buffer還有,plate通常有得賣嗎???因為我不熟悉這實驗
: 暫不考慮自己coating
印象中好像都是整套在賣 沒在單賣coating好的plate
不過這也是兩三年前的事了 不知道現在有沒有 :P
: 謝謝大家,還請有做過的回我一下!!!!
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