[求救] 冷凍切片破洞

看板Biotech作者 (Pipette戀上吉他)時間16年前 (2009/06/12 11:31), 編輯推噓6(6推 0噓 14→)
留言20則, 6人參與, 7年前最新討論串1/1
最近切片有小破洞 想請問大家問題出在哪 步驟 0.9% saline perfusion 4% Paraformaldehyde perfusion 4 hours 4% Paraformaldehyde post-fixation 20% Sucrose in KPBS overnight 腦置乾冰上冷凍硬化 放到裝有OCT的鋁箔容器中 黏住底部 OCT灌滿覆蓋整個腦袋 Nissl染色圖 http://home.educities.edu.tw/todo0987/4X.jpg
http://home.educities.edu.tw/todo0987/10X.jpg
http://home.educities.edu.tw/todo0987/20X.jpg
http://home.educities.edu.tw/todo0987/40X.jpg
麻煩大家了 謝謝 -- ※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc) ◆ From: 163.25.91.202
推
06/12 11:37, , 1F
20% sucrose放了多久?可能脫水的時間不夠
06/12 11:37, 1F
※ 編輯: Shangju 來自: 163.25.91.202 (06/12 11:38)
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06/12 11:39, , 2F
建議脫水的步驟要由低濃度到高濃度的sucrose
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06/12 11:40, , 3F
overnight不夠嗎? 所以有可能脫水不徹底囉
06/12 11:40, 3F
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06/12 11:43, , 4F
這是實驗室所使用的方法 別人切就沒問題 擔心是其他的問題
06/12 11:43, 4F
推
06/12 11:52, , 5F
小空洞大多是固定或脫水的時間不完全，根據你照片上的比
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06/12 11:52, , 6F
例尺來看，固定4hr是沒有問題，所以才會問脫水時間。
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06/12 11:53, , 7F
因為切片的小空洞不是切片刀的問題，排除上述原因，就只
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06/12 11:53, , 8F
剩下可能是sample可能開始腐壞??
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06/12 12:26, , 9F
我排除腐敗問題 因為灌流固定脫水隔夜後馬上切片
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06/12 12:27, , 10F
這下脫水可能性越來越大 真糟!!
06/12 12:27, 10F
推
06/12 15:09, , 11F
sucrose不是都用30%的?
06/12 15:09, 11F
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用30% sucrose浸泡到組織下沉，再置換包埋劑…
06/12 15:11, 12F
推
06/12 20:30, , 13F
我常用的是8%=>15%=>20% 前兩者你可以做30min
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06/12 20:31, , 14F
20%的脫水overnight，組織會下沉表示脫水確實(重要!!!)
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06/12 22:33, , 15F
脫水下沉 確實有見到
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推
06/12 23:36, , 16F
6%,2h→12%,2h→18%,2h→24%,2h→30%,O/N
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06/13 01:47, , 17F
我試試看好了 再跟大家報告 謝謝
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推
06/15 15:15, , 18F
建議10%一天 30%三天 30%三天 沒破過
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11/11 01:31, , 19F
用30% sucros https://daxiv.com
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01/03 16:56, 7年前 , 20F
剩下可能是sample http://yofuk.com
01/03 16:56, 20F
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